直接測定DNA合成是事實(shí)上,現(xiàn)在有一種新的檢測方法能避免這種情況的發(fā)生——EdU檢測。EdU (5-乙炔基-2’脫氧尿嘧啶核苷)也是一種胸腺嘧啶核苷類似物,但其連有的炔羥基團(tuán)在天然化合物中很少見,在細(xì)胞增殖時能夠插入正在復(fù)制的DNA分子中,基于EdU與染料的共軛反應(yīng)可以進(jìn)行快速的細(xì)胞增殖檢測分析,可以有效地檢測處于S期的細(xì)胞百分?jǐn)?shù)。
BrdU 需要DNA 變性后才能與抗體結(jié)合,導(dǎo)致BrdU、Hoechst 染色彌散,邊緣模糊不清;
而EdU 邊緣清晰完整,檢測更靈敏、更準(zhǔn)確EdU可以檢測新合成的DNA,而EU則可以檢測新合成的RNA。EU是一種尿嘧啶核苷類似物,能夠在RNA轉(zhuǎn)錄時期代替尿嘧啶( U )滲入正在合成的RNA分子,基于EU與Apollo?熒光染料的特異性反應(yīng)進(jìn)行RNA檢測。EU能夠在體內(nèi)和體外水平檢測時間和空間上RNA合成的變化,能夠更方便地研究RNA轉(zhuǎn)錄位點(diǎn),結(jié)合相關(guān)抗體標(biāo)記能夠檢測與RNA有相互作用的蛋白。結(jié)合EdU和EU進(jìn)行檢測新合成的DNA和新合成的RNA,可以深入開展細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期、細(xì)胞毒性、DNA復(fù)制及修復(fù)、信號通路等方面的研究。